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MaxCyte電轉(zhuǎn):開(kāi)啟角化細(xì)胞工程化之門(mén),重塑皮膚治療未來(lái)

發(fā)布日期:2024-12-05      瀏覽次數(shù):153


內(nèi)容摘要

(1) 角化細(xì)胞 (Keratinocytes) 在治療多種皮膚、口腔和耳部疾病方面具有潛力。

(2) 成年角化細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增容易,適合自體和同種異體細(xì)胞治療產(chǎn)品。

(3) 之前限制:成年角化細(xì)胞缺乏高效的轉(zhuǎn)染方法。

(4) 本研究目標(biāo):開(kāi)發(fā)符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的、可擴(kuò)展的細(xì)胞工程流程,使用MaxCyte®電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染來(lái)自四個(gè)不同解剖位置的新生兒和成年原代角化細(xì)胞。



實(shí)驗(yàn)流程

• 從全皮樣、鼓膜、扁桃體、前臂等部位提取純凈的原代角化細(xì)胞。

• 胞培養(yǎng)、擴(kuò)增、冷凍保存、基因工程、驗(yàn)證,最終形成細(xì)胞治療產(chǎn)品。



主要發(fā)現(xiàn)

使用MaxCyte技術(shù),高效地將mRNA或CRISPR-Cas9核糖核蛋白 (RNPs) 傳遞給原代角化細(xì)胞,不損害細(xì)胞活性、形態(tài)或生長(zhǎng)能力。

上圖:使用MaxCyte ATx電轉(zhuǎn)儀對(duì)原代包皮角化細(xì)胞進(jìn)行mRNA-GFP或ATTO550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果,顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。


上圖:使用CCR5靶向CRISPR RNP電穿孔后的原代角化細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,電轉(zhuǎn)后細(xì)胞增殖幾乎不受影響。


上圖:使用MaxCyte ATx儀器對(duì)來(lái)自不同解剖位置的原代皮膚成纖維細(xì)胞、扁桃體來(lái)源的口腔角化細(xì)胞和鼓膜 (中耳) 角化細(xì)胞進(jìn)行ATTO 550標(biāo)記的CRISPR RNPs電穿孔后的流式細(xì)胞儀分析結(jié)果,顯示了高效的轉(zhuǎn)染效率。


單次電穿孔可實(shí)現(xiàn)高效的多重基因編輯,簡(jiǎn)化了流程。

MaxCyte電轉(zhuǎn):開(kāi)啟角化細(xì)胞工程化之門(mén),重塑皮膚治療未來(lái)

上圖:分別電穿孔1種、2種、6種CRISPR RNPs后96小時(shí),使用Synthego®多向?qū)Щ蚯贸噭┖羞M(jìn)行的流式細(xì)胞儀分析。


提高了轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性,減少了角化細(xì)胞工程時(shí)間,提高了成功率。

展示了MaxCyte電穿孔過(guò)程的可擴(kuò)展性,可工程化數(shù)百萬(wàn)原代角化細(xì)胞,不損失效果。


MaxCyte電穿孔技術(shù)使原代角化細(xì)胞基因組工程更快,風(fēng)險(xiǎn)更低。



全文結(jié)論

(1) MaxCyte ATx®平臺(tái)提供了一種高效、符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的多重轉(zhuǎn)染方法,用于開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)工程化角化細(xì)胞治療產(chǎn)品。

(2) 電穿孔技術(shù)保持了原代新生兒和成年角化細(xì)胞的高活性、正常形態(tài)和低氧化應(yīng)激。

(3) 該技術(shù)允許多達(dá)6個(gè)CRISPR RNPs的傳遞,經(jīng)過(guò)多輪轉(zhuǎn)染,效率不降低。

(4) 平臺(tái)的靈活性允許快速開(kāi)發(fā)特定亞群的角化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的自體和同種異體細(xì)胞治療流程。


(* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號(hào),作者:宇文數(shù)學(xué),已獲得作者授權(quán))





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